柱层析硅胶分离纯化要根据加入培养基和分配交换样品的不同基本原理，离子交换色谱、凝胶过滤色谱和亲和色谱是分离化合物的三种经典色谱技术。　　

　　柱层析硅胶分离纯化处理的试验方法和模式：

　　1.柱层析硅胶操作步骤的选择

　　柱层析硅胶分离的关键控制方法有自然压力分离、卸压分离和增压分离。自然压力分离很容易。分离方法方便简单，但过柱时间长。虽然减压分离可以节省填充物的需求，但是很多气体会根据填充物蒸发掉有机溶剂，有时水蒸气会凝固在柱头外面，一些易溶的化学物质得不到，还需要应用离心泵或机械泵一起抽真空。压力分离可以加快渗滤液的循环速度，减少样品通过柱子的时间，这是一种更好的方式，类似于自然压力柱，只是增加了工作压力，使渗滤液快速通过柱子。工作压力的保证可以是空气压缩、双球或小气泵等。

　　2.柱头规格和型号的选择

　　销售市场上有各种柱层析硅胶分离的柱。当柱头生长时，相应的托盘数会很高。把它分离出来。目前市场上柱头的径高比一般在1: 5 ~ 10的范围内。在具体应用中，填料的用量一般是样品的30 ~ 40倍。实际选择应基于样品的特性和成分。如果所需成分与残渣分离度较大，可减少填充剂用量，使用相对内径较小的柱头;如果Rf距离小于0.1.则需要增加柱头，增加填充物的量。

　　3.列加载

　　柱层析硅胶有两种填料键：湿式和干式。湿式方便。通常，使用渗滤器来熔化样品，但二氯甲烷、乙酸丁酯等。但是，有机溶剂越低，有机溶剂越高，否则有机溶剂会变成渗滤器。柱头底端的活塞杆一定不能涂润滑液，否则会被渗剂送到浸出液中。可以选择聚四氟乙烯材质的闸阀。干柱上样和湿柱上样没有实际区别，只要柱头能被填充即可。填充的柱头应适当靠近(太密集，渗滤剂流动缓慢)，并且须对称，否则样品将从一侧倾斜流动。同时，柱内不能有大气泡。在大多数情况下，有一些气泡不是很有害，因为只有气泡需要加压才能平息。

　　4.有机溶剂的选择

　　为柱层析硅胶选择合适的有机溶剂系统软件是很重要的。当使用柱层析硅胶时，应考虑三个因素：溶解性、亲和力和分辨率。有机溶剂应选择质优价廉、安全环保的，兼顾乙醚、醋酸丁酯、二氯甲烷、医用乙醚、工业甲醇、正己烷。但正己烷价格高，医用乙醚易挥发。硅橡胶吸附二氯甲烷和工业甲醇是放热反应，容易在柱头上产生气泡。其他有机溶剂相对较少，应根据不同需求选择。因为正在进行微量元素分析，须注意渗剂的含量。一般使用农药残留级或HPLC级。如果是分析纯，就需要特别制作。同时，有机溶剂过柱后循环使用，既保护了环境，又节省了一部分预算。