柱色谱法,俗称柱层析法,是色谱中广泛使用的方法之一。对于含有多种有机物的混合样品,在无法重结晶的有机实验中,柱层析硅胶法可以说是一种有效的分离方法。实验室通常使用由二氧化硅和氧化铝制成的吸附柱作为固定相。硅胶色谱的分离原理是基于物质对硅胶的吸附力。整个色谱过程就是吸附、解吸、再吸附、再解吸的过程。
很多柱层析硅胶化学实验书描述了主要的层分析实验方法,但大部分都是泛泛而谈,有些描述在实验室并不适用。比如很多书上提到,安装立柱的时候,先在底部铺上石英砂,倒入固定的桌子里,再在上面铺上石英砂。它既麻烦又无效,因此在实验室中不适用。根据多年使用柱层析硅胶的操作经验,总结了一些使用柱层析硅胶的技巧。
1.使用硅胶柱色谱。
超短层容易长或短包,有时会残留大量硅,浪费硅。这主要是因为硅等固定相的量不确定。用于柱分析的硅胶一般为100-200目,100ml硅胶的质量约为47g。直径2.8厘米的柱子可以装18厘米高。
2.使用洗脱液。
柱层析硅胶在薄层上有时应该能看到分离效果,但过柱层时很难分离。主要原因是薄层分析用的硅比柱分析用的硅薄很多,所以分离效果很好。解决办法是减少税收系统的两极分化。一般用于柱层析硅胶的去污剂极性比用于薄层分析的展开剂低一倍,可以达到更好的分离效果。当被分离物质的极性范围较大时,可采用梯度洗脱,逐渐增加溶剂的极性,将吸附在硅胶上的其他化合物逐一洗去。